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Polysciences 24765-1試劑

Polysciences 24765-1試劑

更新時(shí)間:2024-08-14

產(chǎn)品特點(diǎn):
Polysciences 24765-1試劑,細(xì)胞轉(zhuǎn)染在基因表達(dá)和蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域至關(guān)重要。Polysciences 24765-1,作為一種有效的轉(zhuǎn)染試劑,能夠高效地將DNA引入細(xì)胞內(nèi)。本文將詳細(xì)介紹Polysciences 24765-1的使用方法。
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加工定制

一、貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染:Polysciences 24765-1試劑

以293T細(xì)胞為例,需要精確控制轉(zhuǎn)染條件以確保*高效率。以下是具體步驟:

細(xì)胞準(zhǔn)備:

使用膠原酶處理細(xì)胞并計(jì)數(shù)。在6孔板中以每孔2×106細(xì)胞接種。每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS 培養(yǎng)基和1 mL的細(xì)胞懸液,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。24 h后,移除之前培養(yǎng)基,每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS。

轉(zhuǎn)染過(guò)程:

1.檢查細(xì)胞匯合度,達(dá)到70%-80%時(shí)開(kāi)始轉(zhuǎn)染。

2.分別用兩份100 µL無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA,使DNA終濃度為1 µg/ml(DNA/總培養(yǎng)體積)和適當(dāng)比例的適量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依據(jù)自己實(shí)驗(yàn)摸索最適比例。

3.將稀釋的Polysciences 24765-1轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒(總體積200 µL)輕輕混勻,室溫孵育30 分鐘。

4.PEI-DNA 復(fù)合物滴加到細(xì)胞培養(yǎng)板每個(gè)孔中,輕搖混勻。注意輕輕沿著孔板邊緣滴入,以免破壞細(xì)胞的粘附性。

5.將培養(yǎng)板放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)24 h。

結(jié)果觀察:

在24小時(shí)后使用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果,超過(guò)80%的293T 細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后的24 h可以觀察到綠色熒光。

二、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染:Polysciences 24765-1試劑

懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟略有不同,小規(guī)模轉(zhuǎn)染時(shí),用新鮮的培養(yǎng)基重懸浮,使細(xì)胞密度達(dá)到 1×106cells/mL,如需大規(guī)模轉(zhuǎn)染細(xì)胞密度要到達(dá)2-3×106cellsml/mL。

以293F細(xì)胞為例:

細(xì)胞準(zhǔn)備:

傳代接種于20 mL 懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培養(yǎng)細(xì)胞至1×106 cells/mL的密度,旋緊瓶口放入搖床,2~4 小時(shí)后可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

轉(zhuǎn)染過(guò)程:

1.用1 mL無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量的DNA,使DNA 終濃度為1 µg/ml,混勻并靜置5 min。

2.用1 mLOptiPRO

SFM(無(wú)血清培養(yǎng)基)稀釋適當(dāng)比例的PEI 40000,混勻并靜置10 min。

3.將稀釋的24765-1轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒輕輕混勻,室溫孵育30分鐘。

4.將PEI-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。

5.基因表達(dá)可在24-72小時(shí)后檢測(cè),時(shí)間取決于細(xì)胞系和轉(zhuǎn)基因。



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